Conţinut

• instrucțiuni de ghidare
• Recuperarea coloanei
• sfaturi
• avertisment
• Ce ai nevoie

Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este o metodă comună de analiză de laborator în care o probă este separată în componentele sale chimice pe măsură ce trece printr-o coloană. Această coloană este umplută cu un material poros, de obicei gel de silice. O coloană standard de fază inversă, cum ar fi C8, poate uneori să se blocheze sau să devină contaminată. Aceste coloane pot fi extrase folosind tehnici foarte simple.

instrucțiuni de ghidare

Solventul potrivit poate recupera o coloană murdară (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Recuperarea coloanei

1. Deblocați coloana și inversați poziția acesteia, astfel încât faza mobilă să intre acum prin ceea ce este în mod normal ieșirea coloanei. Atașați o priză la celălalt capăt al coloanei (care a fost intrarea originală) și lăsați-o să se scurgă într-o descărcare.

2. Pompați o serie de solvenți în ordinea descrescătoare a polarității. O serie de bază recomandată este să porniți cu metanol, apoi să treceți la acetonitril, apoi acetonitril / izopropanol (75:25), izopropanol, clorură de metilen și hexan. Dacă faza mobilă care a fost în coloană a fost absorbantă, este recomandat un pasaj cu apă înainte în metanol. Un debit de unu până la doi mililitri pe minut este suficient și trebuie pompate aproximativ zece coloane de volum din fiecare solvent. Coloana volumului este spațiul interior al coloanei și se calculează cu (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), unde DI este diametrul interior al coloanei și L este lungimea.

   
   

3. Pompați încă zece volume de izopropanol prin coloană pentru al pregăti pentru utilizare cu faza mobilă originală. Dacă faza mobilă inițială a fost amortizată, de asemenea, pompa de apă prin coloană după izopropanol, înainte de a reveni la faza mobilă inițială.

4. Deblocați coloana, inversați-o și cuplați-o din nou, astfel încât aceasta să fie în poziția inițială (astfel încât faza mobilă să intre în partea dreaptă a coloanei). Reconectați ieșirea difuzorului la detector.

sfaturi

• Dacă acest procedeu nu curăță complet coloana, se poate folosi un amestec 50:50 de dimetil sulfoxid (DMSO) și dimetilformamidă (DMF). Reziduurile de proteine ​​și de ioni metalici pot necesita alte tipuri de solvenți, cum ar fi reactivi economizanți de ioni sau o soluție de acid etilen diamină tetraacetic (EDTA).

avertisment

• În unele aparate, coloana vertebrală va avea o sită de metal brut ca orificiu de admisie. În acest caz, revenirea coloanei va permite fazei staționare să părăsească coloana și acest lucru nu este recomandat. Consultați dealerul dvs. dacă nu sunteți sigur.
• Solventul utilizat în acest proces este potențial toxic când este ingerat și inhalat. Utilizați măsuri de precauție obișnuite în timpul manipulării.

Ce ai nevoie

• Dispozitiv HPLC
• apă
• metanol
• acetonitril
• izopropanol
• Clorura de metilen
• hexan