Conţinut

• instrucțiuni de ghidare

Atunci când participați la microbiologie la nivel superior, profesorul dvs. vă poate cere să finalizați un proiect în care trebuie să identificați o bacterie necunoscută printr-o serie de teste. Pentru a identifica corect această bacterie, este necesar să avem toate echipamentele de laborator adecvate și să cunoaștem diferite proceduri de laborator. De asemenea, este avantajos să aveți o diagramă a bacteriilor și a testelor lor de laborator, astfel încât să puteți identifica bacteriile.

instrucțiuni de ghidare

Plăcile de culturi permit bacteriilor să fie izolate pentru a identifica cu ușurință caracteristicile acestora (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Pregătiți toate testele înainte de a începe experimentul. Aceasta include pregătirea plăcilor și a tuburilor de agar, precum și pregătirea indicatorilor necesari, cum ar fi reactivul Kovac. Etichetați toate tuburile și plăcile corespunzător, astfel încât acestea să nu se amestece, ceea ce duce la rezultate eronate.

2. Semănați bacteriile. Aceasta va determina forma și culoarea bacteriei, cum ar fi gram pozitiv (purpuriu), gram negativ (roșu sau roz), nucă de cocos (circulară), spirochet (spirală) sau tije. Pentru a vă însămânța bacteria, veți avea nevoie de o lama curată, de apă, de violet cristalizat, de iod, de înălbitor, de safranină, de hârtie absorbantă, de un microscop ușor și de câteva prosoape de hârtie. După ce ați apăsat buclă, utilizați-o pentru a pune o picătură de apă pe lamă. Trageți bucla din nou și apoi plasați o cantitate mică de bacterii necunoscute în picătură de apă. Treceți lama peste flacără de câteva ori pentru a usca și a atașa complet bacteria la lamă. Acoperiți-l cu violet cristalizat, lăsați-l timp de un minut și apoi spălați ușor. Apoi, acoperiți lama cu iod. Lasati-o timp de 30 de secunde si apoi spalati. Așezați o bucată de hârtie absorbantă pe lama pentru a elimina excesul de apă. Apoi se toarnă înălbitorul pe lamă. După cinci secunde, spălați pentru a îndepărta efectul de înălbire. În cele din urmă, acoperiți lama cu safranină. După 40 de secunde, spălați lama și uscați-o ușor cu un prosop de hârtie. Așezați o picătură de ulei pe locul bacteriilor pe diapozitiv și priviți sub microscop. Observați forma și culoarea bacteriilor vizibile.

   
   

3. Testați oxidaza în bacteriile voastre. Pentru aceasta, veți avea nevoie de un filtru de hârtie, un reactiv de oxidază, E. coli, Pseudomonas și bacteriile necunoscute. În acest test, E. coli și Pseudomonas sunt controalele. Bacteria dumneavoastră trebuie să fie mai mică de 24 de ore pentru acest test. Flambați mânerul și plasați o cantitate mică de fiecare bacterie pe un filtru de hârtie. Utilizați un picurator pentru a plasa o picătură de reactiv oxidază în fiecare bacterie. După 10 secunde, rețineți culoarea fiecărei bacterii. E. coli va da un rezultat pozitiv, iar Pseudomonas va da un rezultat negativ. Bacteriile pozitive pentru enzima citocrom oxidază vor deveni purpurie, iar bacteriile negative nu vor schimba culoarea.

4. Testarea pentru hidrogen sulfurat (SIM). Apăsați mânerul și utilizați-l pentru a ridica niște bacterii de pe farfurie. Inoculați tubul SIM cu bacteriile și acoperiți-l. Lăsați acest tub în cuptor timp de 18 până la 24 de ore la 37 ° C. Identificați dacă bacteria dvs. este mobilă (are flagel). Dacă există o creștere și o tulburare departe de locul în care ați inoculat bacteriile, este mobil. Apoi, plasați două picături de reactiv Kovac în tub. Dacă are o schimbare a culorii la roșu sau roz, bacteria este pozitivă pentru acest test și conține triptofan, fiind astfel un producător de indol. Dacă tubul devine negru, bacteriile sale produc hidrogen sulfurat.

   
   

5. Efectuați un test citrat Simmon. Inoculează bacteriile în două eprubete cu agar de Simmon. Lăsați-le în cuptor timp de 18 până la 24 de ore la 37 ° C. Agarul este inițial verde, dar dacă bacteriile dvs. folosesc citrat ca sursă de carbon, culoarea se va schimba de la verde la albastru. Albastrul este rezultatul pozitiv. Dacă tuburile rămân verde, bacteriile lor sunt negative pentru utilizarea citratului ca o singură sursă de carbon.

6. Efectuați un test roșu cu miez (MRVP). Pentru acest test, aveți nevoie de două tuburi care conțin o soluție de peptonă, tampoane și dextroză (sau glucoză). Inoculați fiecare tub cu bacteria necunoscută și reveniți la sobă timp de 18 până la 24 de ore la 37 ° C. Când este gata, adăugați trei picături de roșu de metil într-un tub. Acesta va fi tubul dvs. MR. Dacă tubul se schimbă de la galben la roșu, bacteria este pozitivă și utilizează o cale mixtă de acid în timpul fermentației (se produc acizi lactici, acetici și formici). În al doilea tub, adăugați trei picături de reactiv VP. Dacă tubul devine roșu, bacteria este pozitivă pentru formarea de diacetil, un produs de fermentație. Dacă tubul devine maroniu, bacteria este negativă.

7. Găsiți bacteriile prin observarea rezultatelor pozitive și negative din schema de evoluție.