Conţinut
- Distrugerea pereților celulelor
- Îndepărtarea lipidelor
- Îndepărtarea proteinelor
- ADN precipitat
- ADN purificator
Alcoolul rece este folosit pentru a separa ADN-ul de soluțiile pe bază de apă, permițându-i să fie purificat pentru testarea genetică ulterioară. Adăugarea alcoolului la o soluție care conține ADN este o modalitate simplă de ao face curată la temperaturi mai scăzute și de a încetini enzimele care o degradează, oferind rezultate mai bune de extracție.
Distrugerea pereților celulelor
Procedurile de extracție pentru obținerea ADN-ului pur trebuie să scape de toate componentele moleculare și chimice ale țesutului din care este extras ADN-ul. Primii pași implică distrugerea pereților celulari. Acest lucru se poate face cu diferiți agenți chimici care sunt caustici pentru membranele celulare, dar nu dăunează ADN-ului. Celulele pot fi, de asemenea, sonicate, omogenizate sau măcinate pentru a distruge membranele.
Îndepărtarea lipidelor
Odată ce pereții celulari sunt distruși, se adaugă un detergent pentru a scăpa de grăsimi și uleiuri care alcătuiesc membranele celulare. Detergenții determină dizolvarea uleiurilor și a grăsimilor în soluție.
Îndepărtarea proteinelor
Proteinele și enzimele pot fi digerate prin adăugarea unei proteaze în soluție. Proteazele descompun proteinele în peptide mici și aminoacizi.
ADN precipitat
Adăugarea de alcool răcit cu gheață la o soluție va precipita și agrega ADN-ul. Materialul genetic poate fi colectat prin centrifugarea probei și decantarea stratului lichid. Ar trebui să existe ca un sediment mic în fundul tubului de centrifugare.
ADN purificator
ADN-ul poate fi spălat prin resuspendare într-o soluție de alcool rece și re-centrifugat de mai multe ori pentru a obține o probă foarte pură. Alcoolii tipici utilizați includ etanol și izopropanol. Acest proces lasă o probă foarte pură în teste riguroase.
