Conţinut
Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este un instrument utilizat pentru separarea substanțelor dintr-un amestec. Separarea și identificarea anumitor substanțe chimice are loc în principal în coloana cromatografică a sistemului. Multe tipuri de coloane sunt disponibile pentru CLAE și fiecare este utilizat pentru un anumit tip de analiză. Coloana C18 este cea mai puternică nepolară utilizată în general. După utilizarea continuă pentru o perioadă extinsă de timp, debitul solventului prin acesta scade și timpul de analiză crește. O altă cauză a scăderii timpului de analiză este de a avea probe care lasă cantități mici de substanțe chimice în materialul coloanei, reducând capacitatea de a le separa. Refacerea suprafeței sale se poate face prin tratarea materialului cu o serie de solvenți specifici pentru a-l curăța de orice probe rămase și revitaliza materialul de susținere.
Pasul 1
Scoateți coloana C18 din direcția de curgere și plasați-o în direcția opusă. Recuperarea solventului prin el va atenua efectul de acumulare care se produce în timp. Trebuie avut grijă să nu se lase prea mult material acumulat la capătul coloanei. Unele fabrici folosesc o plasă mai mare în partea de sus, astfel încât atunci când fluxul schimbă direcția, ochiul este în poziția de mai jos. Această metodă de restaurare se numește inversarea fluxului. Pentru a preveni curgerea acumulării către detectorul sistemului și, eventual, a provoca o obstrucție, permiteți-i să funcționeze fără ca detectorul să fie conectat și direcționați fluxul din coloană către eliminare.
Pasul 2
Așezați tubul de trecere a solventului într-o serie de solvenți pentru a elua orice compus reținut în coloană în direcția opusă. Acești solvenți variază în caracteristicile lor hidrofile. Variantându-i, veți eluda compuși de o natură hidrofilă la fel de diversă. Utilizați 50 ml din fiecare dintre următorii solvenți, succesiv: apă (dacă utilizați un tampon), metanol, izopropanol, diclorometan, hexan, diclorometan și izopropanol.
Pasul 3
Înlocuiți coloana în direcția corectă și faceți solventul să curgă prin ea. Utilizați cel puțin 75 ml pentru a-l spăla înainte de a continua. Testați-l cu un model pe care l-ați folosit când era nou și verificați rezultatele. Acordați atenție atunci când atingeți punctele maxime de reținere și timpul total de analiză. Gradul în care aceste atribute se potrivesc testului inițial când era încă nou va indica gradul în care coloana a fost restaurată. Dacă rezultatele nu sunt satisfăcătoare, înlocuiți coloana cu una nouă și aruncați-o pe cea veche.
